菠菜乙醇酸氧化酶基因的克隆及表达

摘要:

采用RT-PCR技术从菠菜总RNA中分离扩增了乙醇酸氧化酶（GO）基因的cDNA序列，首先克隆到质粒pMD18T，进行了测序。然后将乙醇酸氧化酶的cDNA分别亚克隆至质粒pThioHisC、 pTIGTrx、pBV220和pET-2b(+)，分别转化大肠杆菌DH5α和BL21（DE3），并对重组乙醇酸氧化酶在大肠杆菌中的表达进行了研究。SDSPAGE和酶活分析表明，菠菜乙醇酸氧化酶在E.coli BL21 (DE3) （pTIGTrxGO）和E.coli BL21(DE3) （pET-22b(+)GO）里得到了高水平的表达，其中E.coli BL21(DE3) （pET-22b(+)GO）的乙醇酸氧化酶活性较高。

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