抗对虾白斑综合症病毒单链抗体P1D3基因在毕赤酵母中的分泌表达

摘要:

为了将可中和对虾白斑综合症病毒（WSSV）的单链抗体P1D3在酵母中实现表达，以原核表达载体M13噬菌粒为模板，设计带有SnaBⅠ和EcoRⅠ酶切位点的特异性引物，通过PCR方法扩增P1D3基因。经过酶切、连接反应将该基因连入大肠杆菌酵母穿梭质粒pPIC9K上。重组质粒pPIC9K-scFvP1D3 经 BglⅡ线性化后，用电转化的方法转入毕赤酵母（Pichia pastoris）GS115中。通过PCR和DNA测序，挑选和鉴定阳性克隆。经甲醇诱导，P1D3在酵母中获得分泌表达。ELISA实验结果表明，酵母表达上清液中的单链抗体具有较高的WSSV结合活性，而且其活性要高于大肠杆菌所表达抗体的活性。表达条件优化后，单链抗体在酵母中最高表达量可达302mg/L，为开展对虾被动免疫研究提供了新的抗体来源。

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