粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子/白细胞介素-3融合蛋白的表达研究

摘要:

利用PCR扩增得到粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素-3(IL-3)完整基因片段，将其分别克隆至pGEM-T，构建成GMCSF/IL-3融合蛋白基因，DNA序列与设计预期一致。将得到的融合蛋白基因克隆至T7RNA聚合酶表达载体pT7zz，得到表达质粒pFu，经转化至表达宿主E.coli BL21(DE3),在IPTG诱导下获得融合蛋白目的产物的直接表达。经SDS-PAGE电泳鉴定扫描分析，目的基因产物表达量占菌体总蛋白量的30%以上，目的基因表达产物以包涵体的形式表达。Westernblot鉴定表明，该表达产物可以与GM-CSF抗体及IL-3抗体特异性结合。目的基因表达产物经过包涵体变性、透析复性及柱层析纯化，用GM-CSF、IL-3依赖细胞株TF-1检测，具有明显的生物学活性。

Abstract: