人血管内皮细胞生长因子受体Flt-1胞外区cDNA在毕赤酵母中的表达和鉴定

摘要:

将编码血管内皮细胞生长因子受体Flt-1胞外区1-3 loop 316个氨基酸残基的cDNA插入到含AOX1启动子和α分泌信号肽序列的Pichia pastoris酵母载体中，构建了重组表达质粒pPIC9K/Flt-1(1-3)，转化酵母宿主菌GS115，筛选His⁺Mut^s表型转化子，经摇瓶培养，1%甲醇诱导表达4 d后，SDS-PAGE结果显示，培养上清中Flt1(13)表达量达总蛋白的30%以上。ELISA及Western blot实验表明，表达产物具有良好的抗原性和特异性。生物学活性检测证实其具有结合VEGF的能力和抑制VEGF对HUVEC细胞的促增殖功能。

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