双基因双重组AcNPV的构建及其杀虫活性

摘要:

质粒pAcIEneo携带杆状病毒极早期基因IE1启动子驱动的新霉素抗性基因(neo)，经酶切回收后插入到质粒pAc34DZ1的SacI位点上，构建成多角体外膜蛋白基因(pe)失活的转移载体pAc34DZ2。我们曾构建了一个多角体完整(ocu+)的表达苏云金杆菌(Bt)截短cryIab基因的重组病毒(1)vAcPhBtT。为了改进这一重组病毒的杀虫效率，将转移载体pAc34DZ2与重组病毒(1)vAcPhBtT DNA共转染Sf9细胞，进行第二次同源重组。由于neo基因的表达，用G418筛选得到重组病毒(2)vAcPhBtTPE^-；Southern blot证明vAcPhBtTPE-的构建是正确的，经SDS-PAGE分析，重组病毒(2)仍然能在昆虫细胞中表达80kD的Bt截短毒蛋白，但不表达34kD的多角体外膜蛋白。电镜观察重组病毒(2)无多角体外膜，碱解时病毒粒子释放的速度快于重组病毒(1)。以重组病毒(2)感染甜菜夜蛾三龄幼虫，LC₅₀比野生型病毒小了接近1倍，LT₅₀提前近2d。

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