三结构域重组FN多肽表达质粒的构建及其表达产物性质的初步鉴定

摘要:

为探讨三结构域重组纤连蛋白(FN)在肿瘤治疗中的作用，构建了两个三结构域重组FN表达质粒pF94-62和pF94-82，它们分别编码两个重组多肽：CH62 (FN的Pro 1239-Ser 1515经Met 和Ala-1690Val 2049相连)和CH82 (从CH62中删除了Hep II C端和Cell II结构域N端的Pro1953-Glu1978)。含表达质粒pF94-82的工程菌经37℃培养，CH82得到表达，表达产物主要以包涵体形式存在，经尿素变性与复性处理后，通过肝素琼脂糖亲和层析纯化，纯化产物进行细胞粘附试验。CH62在大肠杆菌中的表达效率很低(5%)，而CH82的表达效率很高(21%)，提示FN分子中Cell II结构域的N端顺序是影响三结构域重组多肽在大肠杆菌中表达的关键结构。纯化的CH82具有结合肝素和结合细胞的功能，且结合细胞的能力比双结构域FN更强。CH82的制备为进一步研究具有更强的抑制肿瘤转移作用及免疫调节作用的基因工程制品奠定了基础。

Abstract: