一种带增强子的原核高效表达载体的构建及初步应用

摘要:

构建的pTO-T7大肠杆菌高效融合表达载体，调控序列中有一个Ω序列和一个T7启动子串联；多克隆位点(MCS)包括8个常用酶切位点；可进行融合表达或者非融合表达，根据不同的需要加以选择；融合蛋白N端为T7g10的12个起始氨基酸，C端为His标签；含kan抗性基因作为选择标记。将增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因克隆至pTO-T7载体，在E.coli中的表达结果表明，融合EGFP达到菌体总蛋白量的50%以上，90%以上的融合蛋白以可溶性形式存在，融合后的EGFP仍保持原有的荧光性质。与同时构建的不含Ω序列的pT-T7载体的表达产量的比较研究结果表明，Ω序列在pTO-T7载体中能显著提高表达效率。

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