人工合成的黑曲霉NRRL3135菌株植酸酶基因在毕赤酵母系统中的高效表达

摘要:

本文以黑曲霉(Aspergillus niger)NRRL3135菌株植酸酶基因为对象，通过基因人工合成的方法去除了该基因的内含子与信号肽编码序列，换用在毕赤酵母(Pichia pastoris)中使用频率较高的密码子以优化其表达。该人工合成植酸酶基因(PhyA-as)以N端融合的方式正确插入到毕赤酵母表达载体pPICZαA。通过电击将重组表达载体整合入酵母染色体DNA中得到重组转化子。SDSPAGE结果与表达产物酶学性质研究表明植酸酶得到分泌表达，且与天然产物性质基本一致。筛选得若干株高产基因工程菌，其中SPANⅢ菌株达到了在摇床培养条件下，每毫升发酵液产生165000u植酸酶的水平，基本满足工业化生产的要求。

关键词:基因人工合成， 植酸酶基因phyA-as, 基因克隆，毕赤酵母表达系统

Abstract:

Key words:基因人工合成， 植酸酶基因phyA-as, 基因克隆，毕赤酵母表达系统