重组虎纹捕鸟蛛毒素Ⅰ在巴氏毕赤酵母中的表达及纯化

摘要:

纹捕鸟蛛毒素Ⅰ是从虎纹捕鸟蛛粗毒中分离纯化，具有镇痛活性的肽类神经毒素。对巴氏毕赤酵母生产的重组HWTX-Ⅰ进行多步纯化，首先将分泌到培养上清的rHWTX-Ⅰ进行90％饱和度的（NH₄）₂SO₄沉淀，再用截留分子量3kD的滤膜脱盐，再用CM阳离子交换层析分离，最后用C₁₈反相层析脱盐纯化，真空干燥后得到的rHWTX-Ⅰ经Tricine SDS-PAGE,质谱鉴定,氨基酸组成分析，N-端序列测定及活性鉴定,证明已获得高纯度的重组HWTX-Ⅰ，摇瓶表达量约为80mg/L，约占总分泌量的23.6%，并对摇瓶发酵条件进行了优化，为利用基因工程方法生产HWTX－I的规模化生产及临床应用提供了证据。

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