嗜水气单胞菌外膜蛋白基因ompTS的高效表达及其免疫原性

摘要:

根据嗜水气单胞菌外膜蛋白基因ompTS的核苷酸序列设计引物，运用聚合酶链式反应（PCR）扩增出与预期大小相符的基因片段。将此基因片段克隆至质粒pRSET A的BamHI和EcoRI位点，构建重组质粒，转化大肠杆菌BL21（DE3），经IPTG诱导获得高效表达，SDS-PAGE蛋白电泳表明在39.9kD处出现超强特异带，占总蛋白的51％。以 Ni-NTA-Conjugate抗体进行Western blot分析证明该399kD的蛋白为所表达的融合蛋白。纯化融合蛋白注射雄性新西兰大白兔可诱导产生特异抗体。ELISA和Western blot检测结果显示，该抗体与表达的融合蛋白和从嗜水气单胞菌中提取的36.9 kD外膜蛋白均呈阳性反应，表明所表达的融合蛋白仍保持原有外膜蛋白的免疫原性，为此融合蛋白作为疫苗的候选成份提供理论基础。

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