用克隆池PCR法筛选小麦簇毛麦易位系6VS/6AL基因组TAC文库获得抗病基因候选克隆

摘要:

用根据抗病基因保守区设计的一对简并性引物，从小麦簇毛麦易位系6VS/6AL cDNA中PCR扩增获得一个具有抗病基因核苷酸结合位点（Nucleotide binding site, NBS）结构特点的DNA片段克隆N7。从小麦簇毛麦易位系6VS/6AL基因组TAC（Transformationcompetent artificial chromosome, TAC）文库的22块96孔板提取所有2112个克隆池（每个池含约1000个克隆）的质粒，再根据N7的核苷酸序列设计一对特异引物，用克隆池PCR（pooled PCR）法经分级筛选从文库中获得一个阳性克隆。以N7为探针，通过Southern 杂交证实了该TAC克隆为真正含有抗病候选基因的克隆。研究结果表明克隆池PCR法对克隆数目巨大的基因组文库的筛选很有效。

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