碱性蛋白酶工程菌发酵条件及重组酶的纯化和性质的研究

摘要:

在5L发酵罐中对重组碱性蛋白酶工程菌株BP071高产碱性蛋白酶的条件进行了研究，通过提高通气量和改变搅拌转速，BP071可在发酵40 h内达到产酶高峰，酶活力最高可达24480 u/mL。利用快速蛋白液相层析（FPLC）技术，建立了快速高效纯化碱性蛋白酶的方案。发酵液通过硫酸铵沉淀、DEAE-A-50脱色及聚乙二醇浓缩得粗酶，再经过CM-Sephadex-C-50、Sephadex-G-75柱层析后得到了单一组份的重组碱性蛋白酶，酶纯度提高了76.2倍。SDS-PAGE显示重组碱性蛋白酶分子量为28 kD。酶学性质研究表明，酶的最适作用pH为11，最适作用温度为60℃，具有良好的pH稳定性和热稳定性。Ca²⁺、Mg²⁺对酶的稳定性有促进作用，Hg²⁺、Ag⁺、PMFS和DFP能强烈抑制酶的活力。SDS和Urea对酶的活力无影响。

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