节杆菌BT801 N-氨甲酰氨基酸水解酶基因的克隆与表达

摘要:

通过PCR从质粒pUC18-169中扩增得到N-氨甲酰氨基酸水解酶基因（hyuC），置于原核表达载体pQE60的T5启动子下游构成表达质粒pQE60-hyuC，并在大肠杆菌M15中实现了该基因的高表达。SDS-PAGE检测表达产物，在相对分子量44kD处有一表达带，经薄层扫描分析目的蛋白占全菌蛋白的40%，主要以可溶性形式存在。酶活性分析结果表明，工程菌M15/pQE60-hyuC的N氨甲酰氨基酸水解酶的比活分别比原始菌株Arthrobacter BT801和亚克隆DH5α/pUC18-169提高了52倍和72倍。在节杆菌BT801和大肠杆菌DH5α/pUC18-169的反应体系中加入等量菌体的工程菌M15/pQE60-hyuC，可使乙内酰脲酶总比活分别提高8.1倍和3.0倍。

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