抗CD20嵌合抗体片段Fab′突变体的表达和活性研究

摘要:

利用PCR方法从抗CD20单链抗体（ScFv）表达载体上扩增抗CD20抗体轻链可变区基因（V^L）、重链可变区基因（V^H），同时在抗体的可变区引入突变，然后将V^H、V^L基因重组到Fab′表达载体pYZF1中，构建抗CD20嵌合抗体Fab′片段表达载体，并在大肠杆菌16c9中进行高效可溶性分泌表达。经大量的筛选，获得一个产量和活性均有所提高的突变克隆。其突变位点在轻链可变区的CDR1区，即G77→A（Ser→Asn）。突变的抗体的表达量为每克干菌3.8 mg，而未突变抗体的表达量为每克干菌1.3 mg。突变体的亲和力常数K_a为2.2×10⁹ L/mol，约为突变前的2倍。竞争性免疫荧光抑制实验表明，突变的Fab′片段能竞争性抑制鼠源性抗CD20抗体HI₄₇和CD20表达细胞Raji细胞的结合，使HI₄₇的结合阳性率由98%下降至37.55%，体外细胞生长抑制试验亦证明突变的Fab′片段的抑制活性明显高于未突变的抗体。

Abstract: