MAGE-3原核表达载体的构建和表达

摘要:

通过RT-PCR扩增957bp的MAGE-3全长编码序列，将该片段克隆至Pgex-4T-2原核表达载体，转化大肠杆菌BL-21，经IPTG诱导表达，并经12%SDSPAGE凝胶电泳，考马斯亮蓝染色及Western blot鉴定，证明了目的基因的有效表达，目的蛋白高达细菌总蛋白的32%。表达产物经Glutathione Sepharose 4B 纯化后，每100mL菌液最终可获得3mg的目的蛋白，蛋白纯度在90%以上。纯化的GST-MAGE-3蛋白在体外冲击树突状细胞，能诱导特异性CTL杀伤肿瘤细胞活性。

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