果蝇中Ecp蛋白的表达、纯化与抗体制备

摘要:

获得特异性抗Ecp多克隆抗体，为进一步研究ecp的功能奠定基础。利用特异引物，通过RT-PCR扩增出编码Ecp蛋白的全长cDNA，克隆至谷胱甘肽S转移酶融合蛋白表达载体pGEX-4T-1(His)6C中，转染大肠杆菌DH 5α，经诱导表达后，利用谷胱甘肽琼脂糖珠从细胞裂解物中特异吸附融合蛋白，经凝血酶裂解，释放出Ecp蛋白，再经Ni-NTA亲和层析，最终获得高纯度的Ecp蛋白。用纯化的Ecp蛋白免疫新西兰家兔，亲和层析纯化抗Ecp抗体。利用该抗体进行的Western Blot结果表明：Ecp蛋白在野生型黑腹果蝇胚胎、三龄幼虫神经系统、成虫、成虫头部组织中均有明显表达，提示ecp可能是一个重要的管家基因。

关键词:ecp， 克隆， 表达， 抗体制备， 黑腹果蝇

Abstract:

Key words:ecp， 克隆， 表达， 抗体制备， 黑腹果蝇