MUC1/Y特异表位肽在大肠杆菌中的可溶性表达及其抗体的制备

摘要:

为获得MUC1/Y的特异表位肽，制备抗体，用PCR扩增其编码序列，克隆到pGEX-2T中，转化DH5α感受态，0.2mmol/L IPTG诱导表达，超声破碎或BPER-TMⅡ试剂处理诱导菌，亲和层析和阴离子交换纯化目的蛋白，SDSPAGE及Western blotting鉴定；免疫家兔制备多抗，初步用于免疫组化分析。结果表明，转化菌经诱导后表达融合蛋白GSTY30，约占菌体总蛋白的20%，大多以可溶形式存在，与诱导温度无关。免疫家兔获得多抗，效价为1∶320 000，纯化的抗体具有特异性，可识别肿瘤细胞表面的MUC1/Y蛋白。所得蛋白和抗体可用于MUC1/Y的表达特征及其生物学功能研究。

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