摘要:用直接克隆法将miniF-lacZ-attFn7-kan 片段插入甜菜夜蛾核多角体病毒（Spodoptera exigua multicapsid nucleopolyhedrovirus, SeMNPV）〖JP〗美国分离株（SeUS1）基因组的多角体蛋白基因框内，miniF是大肠杆菌F因子复制子，携带miniF的重组病毒能够在大肠杆菌中低拷贝稳定复制，称为bacmid。由于SeUS1由不同的SeMNPV基因型组成，每个bacmid携带了一种病毒基因型，所有bacmid构成了SeUS1分离株的BAC文库。REN对111个bacmid分析表明，SeUS1分离株中除了包含具有完整SeMNPV遗传信息的基因型外，还包括不同类型的缺失基因型。将具有完整SeMNPV基因组的基因型SeBAC10转染昆虫细胞，可产生子代病毒，故SeBAC10是一种在真核细胞和原核细胞中均能复制的穿梭质粒。因为SeBAC10中多角体蛋白基因(Seph)被插入失活，将Seph作为报告基因通过位点特异性重组方式插入位于LacZ框内转座子Tn7的附着靶位点attTn7，得到重组SeBAC10 (即SeBAC10ph)转染甜菜夜蛾培养细胞Se301后，细胞出现典型的病理变化，核中出现多角体，证明SeMNPV BAC-TO-BAC外源基因表达载体系统构建成功。
