稻瘟病菌T-DNA插入方法优化及其突变体分析

摘要:

优化了农杆菌介导转化稻瘟病菌获得T-DNA插入突变的条件，包括选择转化子的潮霉素B用量，抑制农杆菌的抗生素头孢噻肟钠和羧苄青霉素的配比，不同转化阶段培养基的选择等。转化1×10⁶个孢子平均可获得约500个左右的转化子，PCR和TAILPCR检测表明约85%转化子中含T-DNA插入。对1520个突变体进行形态变异观察，发现菌落颜色突变的有15个；随机取58个突变体进行比较，发现产孢量减少的4个，孢子萌发率降低的8个，附着胞形成率降低的9个；还获得对水稻品种C101LAC（Pi-1）和751127（Pi-9）致病的突变体，为进一步克隆相应的无毒基因奠定了基础。

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