摘要:为构建表达幽门螺杆菌（Hp）黏附素保守区（AB）的无抗性减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗,采用缺失腺苷酸环化酶基因（Δcya）、环腺苷酸受体蛋白基因（Δcrp）以及天冬氨酸β-半醛脱氢酶基因（Δasd）的鼠伤寒沙门菌（X4072）作为宿主，将编码AB的基因插入Asd+的组成型表达载体pYA248，通过两次转化引入宿主菌，构建了表达AB基因平衡致死的减毒鼠伤寒沙门重组菌X4072（pYA248-AB），采用桥联法ELISA测定X4072（pYA248-AB）培养上清液和裂解上清液中AB的抗原性，参照Meacock叙述的方法及重组菌生长曲线的测定来确定重组菌株的稳定性，通过C57BL/6小鼠口服测定半致死量来确定重组菌的安全性。成功构建了表达AB的减毒鼠伤寒沙门菌重组菌株S.typhimurium X4072(pYA248-AB)，桥联法ELISA测定表明重组菌X4072（pYA248-AB）培养上清中AB的含量高于菌体裂解液，重组菌pYA248-AB在没有选择压力的情况下培养100代，随机挑选的重组菌全部都能生长，且在ELISA测定AB抗原时均显阳性。重组菌的生长曲线测定表明，X4072（pYA248）和X4072（pYA248-AB）的生长状态基本一致；口服重组菌株X4072(pYA248-AB)1.0×1010cfu.30d后，C57BL/6存活率仍为100%。成功构建了表达AB的无抗性的减毒鼠伤寒沙门菌疫苗X4072（pYA248-AB），体外实验表明重组质粒是稳定的，动物实验证明重组菌株是安全的;为防治幽门螺杆菌感染提供了口服活菌疫苗候选株。
