绿色荧光蛋白基因标记野生型生防枯草芽孢杆菌的研究

摘要:

根据绿色荧光蛋白基因和枯草芽孢杆菌木糖诱导型启动子PxylR 序列，分别设计两对特异引物primers PxyF/R和primers gfpF/R，扩增获得了完整的启动子PxylR和-gfp基因序列。进一步以上述产物混合物为模板，以primer PxyF/primer gfpR做引物进行重迭PCR，获得了PxylR-gfp重组翻译融合表达盒。经SphⅠ和KpnⅠ完全酶切后，将PxylR-gfp表达盒分别插入大肠杆菌_苏云金芽孢杆菌穿梭载体pHT315和大肠杆菌枯草芽孢杆菌穿梭载体pRP22。相应的重组表达质粒pGFP315和 pGFP22转化枯草芽孢杆菌感受态细胞。前者在标准菌株168中得到良好发光表型，后者则在标准菌株168和野生目标菌株B916中均得到良好的发光表型。室内平板抑菌实验结果显示B916生防效果与出发菌株没有明显差异，遗传稳定性研究表明连续稀释培养约175代后，工程菌株稳定性为94%，质粒丢失频率低于3.5×10^-4/代。

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