重组人骨形态发生蛋白-6的表达、纯化及其活性分析

摘要:

利用RT-PCR从人胎盘组织中获取BMP-6成熟肽的cDNA 片段，并克隆到表达载体pET-15b中， 构建hBMP_6成熟肽的非融合蛋白表达质粒pET-BMP6，转化E.coli BL21（DE3）。IPTG 诱导4h后，工程菌高表达rhBMP-6成熟肽，在SDS-PAGE上出现预期的新蛋白带(≈15kD)， 约占菌体总蛋白的10%，表达产物以包涵体形式存在。分离和纯化的包涵体溶解于8 mol/L尿素，在变性溶解状态下经阳离子交换层析,得到目的蛋白纯度达95%以上。再经稀释复性后，约80%的rhBMP-6形成同源二聚体。体外活性分析结果显示：rhBMP-6可以提高C3H10T1/2 细胞碱性磷酸酶活性及促进I型胶原、Osterix（Osx）和骨钙素（Osteocalcin）等成骨细胞表型转化标记基因mRNA的表达，证明制备的rhBMP_6具有诱导非骨源性细胞分化成为成骨细胞的作用。

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