苏云金杆菌辅助蛋白P20对杀虫晶体蛋白Cry1Ab表达的影响

摘要:

苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis, 简称Bt)杀虫晶体蛋白Cry1Ab因其C半端缺少了一段含4个半胱氨酸的氨基酸序列而导致蛋白的不稳定，报道苏云金杆菌辅助蛋白P20帮助Cry1Ab蛋白的表达及晶体的形成。利用穿梭载体pHT3101构建3个表达质粒，即pT1B、pP1B和pDP1B，3个质粒都含有cry1Ab基因，不同在于pT1B没有p20基因，pP1B含有p20全基因，而pDP1B不仅含有p20全基因，且在p20基因前插入cry1A?启动子。分别将这3个表达质粒经电转化到苏云金杆菌晶体缺陷型菌株CryB中，获得转化菌株T1B、P1B和DP1B。Western blot表明cry1Ab基因在这3株菌中均表达了130 kD的蛋白，部分降解为大约60 kD的蛋白。蛋白定量分析显示，3株菌130 kD蛋白量的比为1∶1.4∶1.5，降解后的60 kD蛋白量的 比为1∶1.1∶1.6，Cry1Ab蛋白总量的比为1∶1∶2∶1.6。镜检发现，Cry1Ab在3株菌中都形成典型的菱形晶体，其晶体大小为T1B Helicoverpa armigera）均具有明显的杀虫活性，三者的LC₅₀差异不显著。研究表明，P20对cry1Ab基因的表达和晶体形成均有帮助，P20表达量的多少可能是导致Cry1Ab蛋白最终产量有所不同的因素。

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