中华鲟半胱氨酸蛋白酶抑制剂在毕赤酵母中的表达和活性分析

摘要:

为研究鱼类半胱氨酸蛋白酶抑制剂（Cystatin）的功能并探索其在水产加工和病害防治中的应用潜力，将PCR改造后的编码成熟肽中华鲟（Acipenser sinensis）cystatin 基因亚克隆到毕赤酵母整合型表达载体pPICZαA，氯化锂法转化毕赤酵母菌株GS115，构建表达cystatin的酵母基因工程菌。经甲醇诱导、SDSPAGE检测培养基上清液，表明中华鲟cystatin在毕赤酵母中实现了高效表达，重组cystatin表达量约为215mg·L^-1。纯化后重组蛋白纯度达94.2%。生物活性检测结果表明，1μg重组中华鲟cystatin约能抑制15μg木瓜蛋白酶的水解活性。

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