弓形虫GRA6蛋白和P30蛋白的融合表达、纯化及抗原性分析

摘要:

利用基因工程技术制备抗原性好的弓形虫GRA6蛋白和P30蛋白的融合蛋白，并用作抗原检测弓形虫抗体。根据弓形虫GRA6蛋白和P30蛋白的氨基酸序列，通过计算机分析，筛选出其中较强的抗原决定簇。用PCR方法分别扩增含抗原决定簇的基因片段。将这两个基因片段克隆至同一质粒pET28a(+)内，表达一个融合蛋白。将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)，筛选表达该融合蛋白的工程菌。纯化表达的融合蛋白，用已知的6份抗弓形虫IgM阳性血清和大量正常人血清，ELISA法检测纯化融合蛋白的抗原性和特异性。获得了高效表达含弓形虫GRA6蛋白和P30蛋白抗原表位的工程菌，表达的融合蛋白约占菌体蛋白总量的25%。纯化获得了表达的融合蛋白，该蛋白有较好的抗原性和特异性。表达的弓形虫GRA6和P30融合蛋白可用做抗原检测弓形虫抗体，用于临床及孕妇检测，对优生优育有较大意义。

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