摘要:探讨大肠杆菌细胞质氧化还原环境对重组蛋白溶解性的影响。选择含有1对二硫键的牛碱性成纤维细胞生长因子（BbFGF）作为简单蛋白的模式分子，选择含有2对二硫键的人抗HBsAg单链抗体（HBscFv）作为复杂蛋白的模式分子，分别构建表达质粒并转化普通宿主菌和还原酶缺陷型宿主菌E. coli Origami(DE3)，比较表达产物的溶解性和纯化产物的活性。结果发现，BbFGF在普通宿主菌中大部分形成包涵体，在Origami(DE3)中为可溶性表达，但表达量降低。两种工程菌的表达产物经离子交换和肝素亲和层析两步纯化后，MTT法测定活性，发现来自还原酶缺陷型宿主菌的BbFGF活性高于普通宿主菌表达产物，二者的ED50分别是1.6 ng/mL和2.2 ng/mL；HBscFv在两种宿主菌中均形成包涵体，包涵体以6 mol/L盐酸胍缓冲液溶解后，镍离子螯合亲和层析纯化并透析复性，间接ELISA测定抗原结合活性，发现二者活性无明显差异，但在Origami(DE3)菌体破碎后的的上清中可检测到HBscFv活性，纯化后产量为1～2 mg/L，而在普通宿主菌破碎后的上清中检测不到HBscFv活性。上述结果说明，改变宿主菌细胞质氧化还原环境对于含有1～2对二硫键的重组蛋白的可溶性表达具有明显促进作用。
