通过高表达Igf1/Bcl-2或Bcl-2/Cyclin E基因组合使CHO细胞适于在无蛋白培养基中抗凋亡培

摘要:

哺乳动物细胞表达系统是生产重组蛋白药物最常用的表达系统。但在无蛋白培养基中，哺乳动物细胞生长活力差，且容易发生细胞凋亡，因而难以大规模培养。为解决此问题，应用双顺反子表达载体在CHO-dhfr-细胞中同时表达Igf-1/Bcl-2或Bcl-2/Cyclin E基因组合，通过Bcl-2使细胞获得抗凋亡能力；通过Igf-1或Cyclin E促进细胞生长分裂，使细胞获得在无蛋白培养基中生长的能力。以上述基因组合转染CHO-dhfr^-细胞，应用Western blot从G418抗性克隆中分别筛选到Bcl-2高表达克隆若干个，对其中表达Bcl-2最高的CHO-IB3和CHO-BC1做进一步Western blot和流式细胞分析，确认此两个细胞株分别高表达Igf-1/Bcl-2和Bcl^-2/Cyclin E基因组合。分别通过撤去血清和加入放线菌素D诱导细胞凋亡，并以流式细胞术和DNA Ladder法检测细胞凋亡，证明CHO-IB3和CHO-BC1均具有较强的抗细胞凋亡能力。MTT法证明两个细胞株在不含血清的IMDM培养基中的增殖活力显著高于CHO-dhfr-对照细胞。在细胞培养瓶中的连续培养实验表明，CHO-IB3和CHO-BC1在本实验室设计的IMEM无蛋白培养基中的生长速度和活细胞数显著高于CHOdhfr-对照细胞。提示此两个细胞系能够在无血清培养基中抗凋亡高活力生长，适于作为生物工程宿主细胞。

Abstract: