摘要:细胞毒T淋巴细胞(CTL)在控制病原体感染以及抗肿瘤过程中发挥重要作用，因而特异性CTL的检测相当重要；而过去检测CTL的方法都是间接的，最近发展起来的四聚体技术则是直接检测抗原特异性CTL的有效而特异的方法，成为目前研究T细胞免疫应答的关键技术。报道一种简化的四聚体制备程序，利用该程序成功制备加载人巨细胞病毒(HCMV)抗原肽的HLA-A2四聚体，具有特异性结合CTL活性。HLA-A*0201重链基因是通过RT-PCR方法从HLA-A2+供者白细胞中克隆，进而以PCR方法构建在羧基端融合生物素化酶BirA底物肽(BSP)的HLA-A*0201(A2)重链胞外区原核表达载体, A2重组蛋白在大肠杆菌中得到高表达，主要以包涵体形式存在。加载抗原肽的可溶性A2单体是A2胞外区在轻链β2微球蛋白和HLA-A2限制性HCMV pp65495-503抗原肽(NLVPMVATV，NLV)存在时通过稀释法复性获得，以BirA对其进行生物素化，然后以阴离子交换树脂纯化，得到的纯化A2-NLV单体与Streptavidin_PE按4:08比例混合形成四聚体，结合程度在85％以上，流式细胞仪分析显示该四聚体具有与HLA-A2+供者的特异性CTL结合活性。总之，这种简化的四聚体制备程序，不仅有利于该技术的推广，为特异性T细胞免疫研究建立必要的技术平台，而且A2-NLV四聚体在临床监测CMV特异性CTL水平等方面也有应用价值。
