用Rnase Ⅲ制备的小干涉RNA降解SARS冠状病毒基因的细胞内转录物

摘要:

SARS冠状病毒是引起重症急性呼吸综合症的主要原因，目前尚没有特效药物或疫苗对抗这种新病毒。RNA干涉是指双链RNA可以特异地降解细胞内同源基因的Mrna。在哺乳动物细胞中，<30bp的小双链RNA能引起RNA干涉，又可以避免干扰素反应。通过体外转录得到SARS病毒3种基因RNA依赖的RNA聚合酶、刺突蛋白及核衣壳蛋白部分片段的长双链RNA，然后用Rnase Ⅲ有限切割成长度<30bp的小干涉RNA。同时把上述3种基因片段分别连接到质粒Pgl3-Control中，得到的3个质粒Pgl-R、Pgl-S和Pgl-N可以分别在细胞内转录出荧光素酶RNA依赖的RNA聚合酶、刺突蛋白、核衣壳蛋白的杂合Mrna。上述质粒分别和相应的小干涉RNA共转染HEK293F细胞，测定荧光素酶活性，结果小干涉RNA使相应质粒表达荧光素酶的活性显著下降；用逆转录定量PCR反应测量Mrna丰度，结果表明上述小干涉RNA可以特异地降解相应的病毒基因转录物。

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