N端融合不同长度转位肽的重组粒酶B抑制细胞生长作用的比较

摘要:

采用重组PCR法将粒酶B基因的N端信号肽和酸性二肽编码序列去除，与两种不同长度的绿脓杆菌外毒素（PE）转位肽序列分别连接，将它们插入pIND诱导表达载体，通过脂质体法与pVgRXR辅助质粒共转染HeLa细胞，建立了重组PE II-GrBa基因的诱导表达细胞系。松甾酮A诱导后Western印迹检测到目的基因的表达，间接免疫荧光观察到表达细胞出现多核巨细胞的异常形态。两种表达的PE II-GrBa融合蛋白均能够切割粒酶B的细胞内源性和外源性底物，并且使细胞生长速度减慢。其中，PE II-(aa 280358)-GrBa的底物切割能力和生长抑制作用较强。流式细胞仪分析这种抑制作用可能与细胞周期的G2期受到阻遏有关。上述结果证实了PE II-GrBa融合蛋白仍然具有抑制细胞生长的作用，并且较短的转位肽对GrBa活性的影响较小，有助于进一步优化转位肽/细胞毒性效应蛋白重组分子的结构用于肿瘤细胞杀伤。

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