D-氨基酸氧化酶在不同毕赤酵母宿主菌中的表达比较

摘要:

D-氨基酸氧化酶（DAAO）在转化头孢菌素C生产7-ACA和转化DL-氨基酸制备α-酮酸和L-氨基酸上起着重要的作用。采用DNA操作技术，将来源于三角酵母的DAAO基因连接至表达载体pPIC35K上，再将表达质粒pPIC35KDAAO分别整合P. pastoris的宿主细胞KM71和GS115，经筛选获得阳性重组菌PDK13（Mut^S）和PD27（Mut⁺）。重点对两种突变菌的表达条件进行了比较。结果显示：PDK13（Mut^S）株比PD27（Mut⁺）株消耗甲醇慢、诱导时间长，但对通气量要求低、表达水平高，摇瓶活力分别达到2700和2500 IU/L，14L发酵罐内活力分别达到10140和8463 IU/L。初步探索了DAAO对DL-苯丙氨酸的拆分，结果显示基因工程菌表达的DAAO具有良好的转化DL-苯丙氨酸制备苯丙酮酸和L-苯丙氨酸的能力。

Abstract: