以人肝细胞株(L02)总RNA为模板,用RT-PCR扩增出人锰超氧化物歧化酶(hMn-SOD)cDNA ,将其插入含有AOX1基因启动子和α分泌信号肽序列的毕赤酵母表达载体pPIC9k ,构建重组质粒pPIC9k MnSOD ,转化毕赤酵母GS115 ,筛选出整合了多拷贝hMn-SOD基因的Mut+ 表型菌株,摇瓶培养,0.5%甲醇诱导表达。SDS-PAGE分析显示,诱导4d的培养上清中hMn-SOD的表达量约为上清总蛋白的32% ,酶比活可达247.7u/mg。hMn-SOD在巴斯德毕赤酵母中实现了分泌性表达。
凌敏; 赖祥进; 谢科;. 人Mn-SOD cDNA的克隆及其在巴斯德毕赤酵母中的表达[J]. 生物工程学报, 2005, 21(3):
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