杆状病毒转移载体的构建及绿色荧光蛋白在斜纹夜蛾幼虫中的表达

摘要:

为构建斜纹夜蛾核型多角体病毒 （SpltMNPV）的重组病毒，以该病毒日本C3株基因组DNA为PCR扩增模板，根据GenBank SpltMNPV中国G2株基因序列，设计了两对引物分别扩增多角体蛋白基因的5′端侧翼序列（含启动子）和3′端侧翼序列（含终止子），将这两个片段依次克隆于pUC18质粒载体后，再将绿色荧光蛋白(GFP)基因亚克隆到上述载体的多角体蛋白基因启动子和终止子之间，获得转移载体pSplt-gfp。将pSplt-gfp与野生型SpltMNPV 基因组DNA共转染Spli细胞，通过同源重组和有限稀释法筛选，获得了以gfp基因替代多角体蛋白基因的重组病毒SpltMNPV-gfp。SpltMNPV-gfp感染Spli细胞和斜纹夜蛾幼虫，分别在感染24h和48h后可发现绿色荧光蛋白的表达。该重组病毒的获得，为建立斜纹夜蛾核型多角体病毒表达体系奠定了基础。

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