SARS冠状病毒核衣壳蛋白在酵母中的表达与活性检测

摘要:

用PCR扩增SARS冠状病毒N蛋白全长cDNA，克隆到酵母表达载体pPIC3.5K，构建pPIC3.5K-SCoVN酵母表达质粒。表达质粒线性化后电转化到毕赤酵母GS115中，经G418-RDB, MM/MD平板与PCR扩增筛选获得His⁺ Mut⁺ 重组菌株。比较研究了不同的培养基、溶解氧以及甲醇浓度对菌株生长与重组蛋白表达的影响。结果表明：FBS培养基最适宜重组菌的生长与表达，溶氧对菌体的生长与表达有显著的影响，甲醇诱导最佳终浓度为1％（V/V），SDS-PAGE分析重组蛋白的表达量，发现重组N 蛋白表达量占细胞总蛋白的6％，每升培养基可以生产410mg重组N蛋白，生物量达45OD600。Western blotting结果表明，重组N 蛋白对鼠源单克隆抗体以及SARS病人恢复期血清具有较强的特异性反应。对摇瓶培养条件进行了发酵罐放大实验，结果生物量达到348OD600，表达量达到 2.5g/L，分别为摇瓶表达的7.7倍和6.1倍，为SARS早期血清学诊断研究以及为N蛋白在病毒复制以及致病机理的研究奠定了一定的基础。

Abstract: