富含二硫键的膜蛋白p185胞外区在大肠杆菌中的可溶性表达和性质鉴定

摘要:

Her2/c-erbB-2基因（其产物为膜蛋白p185）是表皮生长因子受体（EGFR）基因家族的一员，在约30％的乳腺癌中发现了其过量表达。为了鉴定抗p185单克隆抗体的抗原表位并进一步研究它们的相互作用，采用PCR的方法从含Her2/c_erbB_2基因的pBabe/erbB_2质粒中扩增了p185胞外区的富含二硫键的第一、二结构域和第四个结构域。产物克隆到pGEX/4T-1载体后，转化大肠杆菌Origami B（DE3）pLysS菌株，用低浓度IPTG进行低温过夜诱导后将菌体压力破碎，SDS-PAGE检测表达上清，得到了可溶性表达的融合有GST的目的蛋白。经ELISA、Western blot等方法鉴定，可溶性表达产物具有完全的抗体结合活性，且当用凝血酶把GST切掉后该活性仍然保留。P185胞外区融合蛋白的成功表达将为二硫键富含类蛋白的表达提供参考；并为将来具有肿瘤细胞生长抑制活性的抗p185单克隆抗体的抗原表位鉴定，以及为EGFR家族受体的结构和功能关系的研究打下基础。

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