抗菌肽Adenoregulin基因工程菌培养条件的优化及分批发酵研究

摘要:

denoregulin（ADR）是来源于南美树蛙Phyllomedusa bicolor皮肤的含有33个氨基酸的抗菌肽，在非极性环境中形成α_螺旋型结构，具有抗菌活性强、抗菌谱广的特点。将ADR基因克隆于pET32a载体上，转化大肠杆菌BL21(DE3)，对这一工程菌株的培养条件进行了优化。通过正交试验，考察诱导时机、诱导剂量和诱导时间三个因素的不同水平对蛋白表达的影响，结果发现诱导时机的影响尤为显著，考察了9种不同培养基对表达量的影响，发现培养基中加入葡萄糖对目标蛋白的稳定表达起了重要的作用，确定最佳培养条件为：培养基为2×YT+0.5%葡萄糖，诱导时机为OD600=0.9左右，诱导剂IPTG加入的终浓度为0.1mmol/L，诱导时间为4h。采用前期恒pH、后期指数流加的策略进行工程菌BL21(DE3)/pET32a-adr的高密度培养，在整个流加过程中，通过控制葡萄糖的加入量，将菌株的比生长速率控制在015h^-1，乙酸浓度也被控制在较低的水平(<2g/L)，但是质粒丢失严重，在发酵结束时，约有40%的大肠杆菌中不带质粒，这导致了目标蛋白的表达量下降严重，但是表达的目标蛋白90%以上为可溶性形式。表达的融合蛋白无抑菌活性，而裂解后得到的ADR单体具有明显的抑菌活性。

Abstract: