东亚钳蝎毒素BmαTX14的基因组克隆、真核表达纯化及功能的初步研究

摘要:

以东亚钳蝎(Buthus martensii Karsch，BmK) BmαTX14全长cDNA序列设计引物，克隆BmαTX14成熟肽，插入毕赤酵母表达载体pPIC9K中，转化酵母，诱导表达。TricineSDS PAGE和Western blot分析显示，表达产物以可溶性分子形式存在于培养上清中，诱导84h时的表达量达到高峰，约为120mg/L。通过Ni金属螯合层析柱亲和层析、聚乙二醇沉淀、凝胶分子筛层析获得纯化的rBmαTX14融合蛋白，经毒性实验表明，具有明显的抗昆虫活性。同时以蝎基因组总DNA为模板进行PCR扩增，得到BmαTX14基因克隆，序列分析显示： BmαTX14在编码信号肽的基因序列中有1个长408bp的内含子，其基因组织结构具有α型Na⁺通道毒素的特征。从功能活性和基因组织结构两个角度证实BmαTX14为α型Na⁺通道毒素。

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