摘要:Δ6-脂肪酸脱氢酶是一种膜整合蛋白，也是多不饱和脂肪酸合成途径中的限速酶。在前期工作中，通过RT-PCR和RACE技术，从少根根霉NK300037中克隆到一个潜在编码Δ6-脂肪酸脱氢酶的序列，序列和功能分析结果表明该序列具有一个长度为1377bp、编码由458个氨基酸组成、大小为52kD的新的Δ6-脂肪酸脱氢酶基因。把少根根霉Δ6-脂肪酸脱氢酶基因(RAD6)亚克隆到表达载体pPIC3.5K，构建重组表达载体pPICRAD6，并转化到毕赤酵母菌株GS115进行表达。提取酵母细胞总脂肪酸和进行甲酯化，经气相色谱和气相色谱质谱连用分析表明，目的基因的编码产物能将C16∶1、C17∶1、C18∶1、亚油酸和α-亚麻酸在Δ6和7位间特异性脱氢而引入一个新的双键，生成更高不饱和的脂肪酸，该催化反应没有链长特异性，只有键位特异性。此外，按Kozak序列特点，改变目的基因转译起始密码子周边序列结构，并把改变后序列导入毕赤酵母GS115中进行功能表达分析，结果表明在毕赤酵母中这种改变同样能提高目的基因的表达水平。综合所有分析结果表明，巴斯德毕赤酵母更适合用来综合分析Δ6-脂肪酸脱氢酶基因的功能。
