里氏木霉内切-β-甘露聚糖酶基因在毕赤酵母中的表达

摘要:

采用PCR方法从里氏木霉(Trichoderma reesei)基因组中获得含有两个内含子的内切-β-甘露聚糖酶全长基因，末端重叠延伸PCR去除内含子后，将其插入到巴斯德毕赤酵母(Picher pastoris)表达载体pPIC9K中，位于α-因子信号肽序列的下游，并与之同框，获得重组质粒pM242。重组质粒线性化后用电击法转化毕赤酵母菌株GS115。经大量筛选，获得高效分泌表达内切甘露聚糖酶的毕赤酵母工程菌株Gpmf25。摇瓶发酵结果表明，培养基中甘露聚糖酶的活力可达12.5IU/mL。重组酶最适pH和最适反应温度分别为5.0和80℃，在pH5.0～6.0时酶活稳定，在pH5.4时70℃保温30min酶活维持50％以上。

Abstract: