抗松材线虫纤维素酶单链抗体库的构建及筛选

摘要:

构建鼠源性松材线虫纤维素酶（Bursaphelenchus xylophilus cellulase, BXC）的噬菌体单链抗体库，从中筛选特异性BXC的单链抗体。以BXC为抗原免疫BALB/C小鼠，从脾脏提取总RNA，用RT-PCR技术扩增小鼠抗体重链（V_H）和轻链(V_L)可变区基因。经重叠PCR(SOE-PCR)在体外将V_H和V_L连接成单链抗体(scFv)基因，并克隆到噬菌粒载体pCANTAB5E中，电转化至大肠杆菌TG1，经辅助噬菌体超感染，成功构建了库容为5×10⁴的Anti-BXC单链抗体库，并从该抗体库中初步筛选到了特异性识别BXC的噬菌体单链抗体scFv。将表面展示单链抗体的单克隆噬菌体转化大肠杆菌HB2151进行可溶性表达，SDS-PAGE及Western blot分析结果显示，可溶性scFv获得表达，且与BXC具有结合活性，为松材线虫的检验检疫以及病理学研究奠定了基础。

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