烟草MARs的分离及其功能分析

摘要:

从烟草基因组中克隆到两条新的MAR片段（M14和M17），序列分析表明，它们具有90%AT-box,A-box,T-box，碱基非配对区域，拓扑异构酶Ⅱ识别位点，弯曲DNA序列，复制起始序列和ATATTT等典型的MAR序列特征,并与原有MAR序列的特征不同。将它们分别构建到植物表达载体pCAMBIA2301 GUS基因（uidA）表达盒一侧及两侧，通过农杆菌介导转化烟草。组织化学染色法定性检测GUS活性表明，带有M14和M17的uidA基因在转基因烟草中稳定表达。GUS活性的定量检测表明，表达载体上uidA基因一端或两端连接有MAR的转化烟草中,GUS的表达水平与对照相比都有了明显提高，而uidA基因两侧连有MAR的载体提高表达水平的效果优于一端连有MAR的载体，可使GUS活性增强3.14倍,但不同转化个体之间表达水平的差异仍然明显。上述结果表明，所得DNA序列为两条新的MAR片段，并且具有提高转基因表达水平的功能。

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