猪圆环病毒2型ORF2基因在昆虫细胞中的表达及其特性

摘要:

利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统将圆环病毒2型的ORF2全基因克隆到杆状病毒转移载体pFastBac^TM1中，获得重组转移载体pFast-OFR2，再将其转化进含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac中，发生转座作用，经蓝白菌落筛选得到含ORF2基因的重组穿梭载体Bac-ORF2，以脂质体介导的方法将重组穿梭载体转染sf9细胞，获得重组病毒，命名为Ac-ORF2。间接免疫荧光分析表明，PCV2阳性血清能使Ac-ORF2感染的sf9昆虫细胞呈强的荧光着色; SDS-PAGE与Western-blotting分析可见大小约为28kD的特异性带，表明Ac.ORF2在sf9细胞中成功表达了PCV2-ORF2蛋白。将该表达蛋白纯化并经磷钨酸负染后，通过电镜观察可见形态与PCV2病毒粒子相似的病毒样颗粒(VLPs)，其中某些颗粒由于中心浓染而似空衣壳，其直径也为17nm左右。

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