人sBCMA cDNA的克隆、高可溶性融合表达及活性分析

摘要:

BCMA是除TACI外BAFF和APRIL共用的另一细胞表面受体。为了研究sBCMA作为拮抗受体的可能及获得活性sBCMA蛋白用做结构功能研究，我们以RT-PCR法从人B系非洲淋巴瘤细胞株Raji总RNA中扩增出人BCMA的全长cDNA，经克隆测序证实所克隆的基因为人BCMA。继而通过嵌套PCR扩增出胞外可溶区（sBCMA，46个氨基酸组成，含有一个6个半胱氨酸的保守CRD,构成3个二硫键）cDNA，构建原核表达载体pET43.1a(+)sBCMA，在大肠杆菌菌株Origami B(DE3) pLysS中高可溶性融合表达出重组蛋白sBCMA-NusA-His6，同时克隆表达了融合蛋白NusA-His-6。经Ni+NTA亲和纯化后的目的蛋白进行细胞学实验表明sBCMA 能特异阻断BAFF促小鼠B细胞的增殖作用，而NusA-His6则不能，证实我们所表达得到的受体胞外可溶性片段sBCMA与配体具有较高的结合活性。sBCMA融合蛋白的成功表达将为二硫键富含类蛋白的表达提供参考，并为研究其临床应用以及BAFF和APRIL受体结构和功能的关系奠定基础。

Abstract: