VEGF重组质粒pcDNA/V的构建及其在大鼠急性心肌缺血模型中的表达

摘要:

构建人血管内皮细胞生长因子（VEGF₁₆₅）真核表达载体，并研究其在细胞水平和大鼠急性心肌梗死动物模型中的表达。利用RT-PCR方法，从人扁桃体组织中扩增人VEGF₁₆₅基因，构建真核表达载体pcDNA/V。应用脂质体介导的基因转移技术，将pcDNA/V转染至人胚肾细胞（293细胞）中，经G418筛选获得稳定表达的重组质粒细胞克隆。ELISA、Western blot检测证实重组质粒pcDNA/V能在293细胞中高效表达外源VEGF基因，鸡胚绒毛尿囊膜血管生成实验证实表达产物具有促血管生成的活性。进一步的体内表达研究，建立大鼠急性心肌梗死模型，将重组质粒pcDNA/V、空质粒pcDNA31(+)分三点注射于梗死交界处心肌内，四周后取材。经免疫组化染色检测，pcDNA/V组在梗死交界区有VEGF阳性表达；电镜观察显示，pcDNA/V组在梗死交界处心肌细胞间有大量毛细血管内皮细胞增生。实验结果表明：成功克隆了人VEGF165基因，构建了其真核表达载体。体内、外表达研究证实重组质粒的表达产物具有促血管生成的生物学活性，为VEGF基因治疗缺血性心肌病的研究提供实验基础。

Abstract: