表达IBDV VP2融合蛋白的重组MDV的构建及其免疫特性

摘要:

将增强型绿色荧光蛋白基因（eGFP）与鸡传染性法氏囊病病毒（IBDV）的VP2基因融合，插入马立克氏病毒（MDV）CVI988/Rispens的非必需区US10片段中，成功构建表达VP2融合蛋白的MDV CVI988转移载体pUC18-US10-VP2。将转移载体质粒与CVI988/Rispens疫苗毒共转染鸡胚成纤维细胞（CEF），筛选获得表达VP2融合蛋白的重组MDV（rMDV）。聚合酶链式反应（PCR）和间接免疫荧光实验（IFA）证明，rMDV传至第31代仍能稳定表达VP2融合蛋白。用rMDV免疫SPF鸡，进行IBDV攻毒保护试验，1日龄SPF鸡分别用1000PFU、2000PFU、5000PFU的rMDV进行免疫，33日龄用100LD50的IBDV JS超强毒进行攻毒，鸡的免疫保护率分别为50%、60%、80%。值得注意的是，5000PFU的rMDV一次免疫1日龄SPF鸡，其法氏囊组织病理损伤等级与IBD中等毒力活疫苗常规二次免疫相当（2.0/1.5），其保护效果无显著差异（p＞0.05），而与非重组病毒免疫组相比较，保护效果差异显著（P＜0.01），这表明构建的表达IBDV VP2融合蛋白的rMDV可以有效地为SPF鸡提供免疫保护作用。

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