人白细胞介素26的基因克隆及其在大肠杆菌中的表达

摘要:

克隆人白细胞介素-26（human interleukin-26,Hil-26）基因，构建高效稳定的大肠杆菌表达菌株。对GenBank上报道的Hil26基因进行序列分析后设计合成引物，利用RT-PCR技术从人外周血单个核细胞(PBMC)总RNA中反转录并扩增得到人成熟肽IL-26基因。将得到的基因克隆到Pmd18-T载体中，菌落PCR筛选、酶切鉴定并进行DNA序列分析。用Bam-HI和EcoRⅠ将目的片段切下，插入表达载体Pbv220相应的位点。42℃热诱导表达目的蛋白，SDS-PAGE分析显示表达蛋白约占菌体总蛋白的20%，Western印迹法证实重组蛋白为特异性蛋白，分子筛纯化后纯度达90%以上。表达的重组蛋白经谷胱甘肽复性缓冲液复性，用RT-PCR检测复性的重组蛋白能促进PBMC合成IFN-γ。

Abstract: