含2A片段的重组黄热病毒17D疫苗表达载体的构建

摘要:

黄热疫苗是一种减毒的黄热病毒17D（YF-17D）活疫苗，是现有疫苗中最安全、最有效的疫苗之一，适于发展为疫苗载体。用RT-PCR法扩增出覆盖YF17D全长基因组的3个cDNA片段：5′cDNA（A）、3′cDNA（B）和中间cDNA（C），同时引入SP6增强子序列、酶切位点和重复序列。顺序将A和B同E.coli yeast穿梭质粒pRS424连接，再与C共转染酵母菌，利用缺少色氨酸和尿嘧啶的选择性固体培养基筛选出含YF-17D全长基因组的cDNA质粒。以该质粒为模板，经过DNA重组和酵母同源重组，获得含有口蹄疫病毒蛋白水解酶2A片段的重组YF-17D表达载体。将该表达载体体外转录后，电击转染BHK-21细胞。间接免疫荧光检测结果表明，RNA转录体在BHK-21细胞中进行了稳定的表达；滴度测定与形态学观察结果表明，重组病毒在细胞中的生长曲线等特征同母本YF-17D十分相似。结果提示，利用酵母菌同源重组在2A部位引入异种抗原基因，重组YF-17D表达载体pRS-YF-2A1具有成为高效活疫苗表达载体的潜力。

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