串联表达PRRSV M与GP5蛋白重组腺病毒的构建及其免疫特性研究

摘要:

利用PCR扩增出猪繁殖与呼吸综合征病毒的M基因，按正确的读码框与GP5基因串联，成功构建穿梭载体pShuttle-CMV-M-GP5，经PCR、测序鉴定正确。PmeⅠ线性化后在BJ5183大肠杆菌内与腺病毒骨架载体pAdEasy-1同源重组，产生重组腺病毒DNA。重组腺病毒DNA经PacⅠ线性化后用脂质体转染HEK-293A细胞，在细胞内包装成完整的腺病毒，通过IFA可以检测到M与GP5串联的重组腺病毒构建成功，可以正确地表达目的蛋白。将构建好的重组腺病毒免疫小鼠，结果表明可以诱导产生较强的体液免疫应答（ELISA抗体和中和抗体）和细胞免疫应答（淋巴细胞增殖和CTL反应）。证明该重组腺病毒具有较好的免疫原性，为下一步猪体免疫试验奠定了基础。

Abstract: