修饰的含前S1、前S2免疫决定簇乙肝表面抗原融合多肽在毕赤酵母中的共表达

摘要:

用BamHⅠ和BglⅡ双酶切含SS2嵌合基因片段的重组质粒pAO815-SS2，分离含AOX1启动子区、SS2嵌合基因和AOX1转录终止序列的表达盒。将分离的BamHⅠ-BglⅡ表达盒与经BamHⅠ线性化的pAO815-SS1质粒连接，转化大肠杆菌Top10F′，提取质粒，用BamHⅠ和BglⅡ双酶切分析重组质粒并筛选正向插入SS2表达盒的重组子。将该重组质粒用电转化法导入Pichiapastoris GS115细胞，经表型筛选、小试表达和产物鉴定，构建了重组表达菌株GS115-SS1S2。重组菌株经甲醇诱导后制备抗原粗提液，进一步进行ELISA和Western blot鉴定。ELISA结果显示，产物同时具有S、前S1和前S2抗原性。Western blot分析进一步表明，表达产物既能与S抗体结合，也能与前S1和前S2抗体结合。工程菌经高密度发酵，表达量达到300～600mg/L。抗原经纯化后进行电镜观察，形成直径20～35nm的球形颗粒。纯化抗原经SDS-PAGE分析，SS1和SS2多肽仍然保持完整，基本无降解。

Abstract: