摘要:通过PCR从三黄肉鸡的肝脏基因组中扩增了鸡α干扰素 (ChIFN-α)全长基因。序列分析表明ChIFN-α基因全长582bp，亚克隆其成熟蛋白编码基因(489bp)，利用基因重组技术构建了E.coli/pET-28a(+)-IFNα，使IFN-α置于pET-28a的T7启动子下游并同6×His(多聚组氨酸标签)_Tag融合。经酶切鉴定，DNA测序证实重组质粒构建正确；将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)，IPTG诱导表达，SDS-PAGE，Western_blot分析证实表达出22kD左右的融合蛋白，表达的蛋白以不溶性的包涵体形式存在并且具有良好的免疫学活性。提纯的包涵体纯度可达70%以上，用镍亲和层析方法纯化蛋白则可达到95%。经透析复性后的蛋白在鸡胚成纤维细胞上能够抑制H9N2禽流感病毒的复制。鸡胚试验中重组干扰素抗病毒效果好：在H9N2禽流感病毒攻毒组中，能保护鸡胚并使其孵出率达到100%的重组干扰素最小蛋白含量为2μg；重组干扰素对新城疫病毒复制也有一定的抑制能力，延迟该病毒复制时间为12h至48h；雏鸡试验表明重组干扰素也能较好地抵抗H9N2禽流感病毒对雏鸡的感染。两组试验均表明，亲和层析纯化蛋白是包涵体蛋白活性的20倍左右。
